Se clonó una subunidad gamma 2 (forma corta) del receptor de ácido gamma-aminobutírico A (GABAA) (GABAAR) a partir de una biblioteca de ADNc de corteza cerebral humana adulta en el bacteriófago lambda gt11.
El asa intracelular (IL) de 261 pb situada entre M3 y M4 fue amplificada mediante la reacción en cadena de la polimerasa e insertada en los vectores de expresión lambda gt11 y pGEX-3X. Se purificaron las proteínas de fusión de la beta-galactosidasa (LacZ) y la glutatión-S-transferasa (GST) que contienen la gamma 2IL, y se fabricó un anticuerpo de conejo contra la LacZ-gamma 2IL.
El anticuerpo reaccionó con la gamma 2IL de ambas proteínas de fusión LacZ y GST e inmunoprecipió el receptor GABAAR/benzodiacepina (GABAAR/BZDR) del cerebro de vacuno y rata. El anticuerpo reaccionó en inmunoblots GABAAR/BZDR purificados por afinidad con una amplia banda peptídica de 44.000-49.000 M(r).
Los estudios de inmunoprecipitación con el anticuerpo anti-gamma 2IL sugieren que en la corteza cerebral, el 87% de los GABAAR con alta afinidad por las benzodiacepinas y el 70% de los GABAAR con alta afinidad por el muscimol contienen al menos una subunidad gamma, probablemente una gamma 2.
Estos resultados indican que existen GABAAR de unión al muscimol [3H] que no se unen a [3H] flunitrazepam con alta afinidad. Las inmunoprecipitaciones con este y otros anticuerpos anti-GABAAR/BZDR indican que la combinación más abundante de subunidades de GABAAR en la corteza cerebral involucra a las subunidades alfa 1, gamma 2 (u otras gamma), y beta 2 y/o beta 3. Estas subunidades coexisten en > 60% de las GABAAR/BZDR en la corteza cerebral.
Los resultados también muestran que una proporción considerable (20-25%) de las GABAAR/BZDR cerebelosas es insensible al clonazepam. Al menos el 74% de estos receptores cerebrales, que probablemente contienen alfa 6, también contienen subunidad(es) gamma 2 (u otra gamma).
Las subunidades alfa 1 y beta 2 o beta 3 también se asocian frecuentemente con la gamma 2 (u otra gamma) y la alfa 6 en estos receptores cerebrales.
Khan ZU1, Fernando LP, Escribá P, Busquets X, Mallet J, Miralles CP, Filla M, De Blas AL
J Neurochem. 1993 Mar;60(3):961-71. PMID: 8382267.